光學(xué)顯微鏡成像受到多種因素的影響,這些因素可以歸納為以下幾個(gè)方面:
一、被檢物體準(zhǔn)備
切片厚度:切片厚度是否適中非常關(guān)鍵,過厚的切片會(huì)導(dǎo)致光線穿透困難,影響成像清晰度。
蓋玻片質(zhì)量:蓋玻片是否符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),其平整度、清潔度等都會(huì)影響成像質(zhì)量。
二、顯微鏡硬件因素
物鏡檔次:物鏡按檔次可分為多個(gè)級(jí)別,常用的為平場(chǎng)消色差物鏡。物鏡檔次低會(huì)導(dǎo)致成像質(zhì)量下降,因此建議選擇較G檔次的物鏡。
聚光鏡孔徑光欄:聚光鏡孔徑光欄應(yīng)與物鏡的數(shù)值孔徑相匹配,以獲得Z佳的圖像分辨率。
調(diào)焦系統(tǒng):調(diào)焦系統(tǒng)的精度對(duì)成像質(zhì)量有重要影響。熟練的操作者能快速找到圖像并聚焦,提高工作效率。
載物臺(tái):載物臺(tái)的精度和穩(wěn)定性影響成像質(zhì)量。雙層機(jī)械移動(dòng)平臺(tái)通常具有較好的精度和穩(wěn)定性。
非球面集光鏡:能提供非常均勻的照明光線,使得觀察到的顯微圖像襯度J佳。
三、光學(xué)相差
色差:多色光為光源時(shí),由于各種光的波長(zhǎng)不同,在通過透鏡時(shí)的折射率也不同,導(dǎo)致物方一個(gè)點(diǎn)在像方形成色斑,影響成像清晰度。
球差:軸上點(diǎn)的單色相差,由于透鏡的球形表面造成,使得一個(gè)點(diǎn)成像后不是亮點(diǎn),而是一個(gè)中心亮、邊緣模糊的亮斑。
慧差:軸外點(diǎn)的單色相差,導(dǎo)致光點(diǎn)的像形成逗點(diǎn)狀,影響成像質(zhì)量。
像散:軸外點(diǎn)單色相差,使物點(diǎn)在成像后變成兩個(gè)分別且相互垂直的短線,形成橢圓形斑點(diǎn)。
場(chǎng)曲:透鏡存在場(chǎng)曲時(shí),整個(gè)光束的交點(diǎn)不與理想像點(diǎn)重合,導(dǎo)致整個(gè)像平面是一個(gè)曲面,影響觀察。
四、其他因素
數(shù)值孔徑(NA):描述了透鏡收光錐角的大小,是判斷物鏡性能的關(guān)鍵指標(biāo),影響分辨率、焦點(diǎn)深度、鏡像亮度等。
分辨率:能被顯微鏡清晰區(qū)分的兩個(gè)物點(diǎn)間的Z小距離,是顯微鏡能否看清楚小物體或細(xì)節(jié)的關(guān)鍵。
光通量:物鏡決定進(jìn)入系統(tǒng)的光通量,影響視野亮度和成像質(zhì)量。
使用環(huán)境:顯微鏡應(yīng)放置在干燥清潔的房間,避免光學(xué)部件發(fā)霉、金屬部分生銹以及粘滿灰塵。同時(shí),避免與腐蝕性化學(xué)品接觸,防止損壞。
綜上所述,光學(xué)顯微鏡成像受到被檢物體準(zhǔn)備、顯微鏡硬件因素、光學(xué)相差以及其他多種因素的影響。在實(shí)際使用中,需要綜合考慮這些因素,以獲得高質(zhì)量的成像效果。